Proposal Penelitian

USULAN PENELITIAN TUGAS AKHIR

KARYA TULIS ILMIAH

DAYA HAMBAT DAUN SOSOR BEBEK (Kalanchoe pinnata) 

 TERHADAP  PERTUMBUHAN BAKTERI

 Staphylococcus aureus

Diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan Pendidikan Program Diploma III Kesehatan Bidang Analis Kesehatan

 

Oleh:

IRENE ISTIURMAULI PURBA

NIM P17434012056

KEMENTERIAN KESEHATAN RI

POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES SEMARANG

JURUSAN ANALIS KESEHATAN

TAHUN 2015

HALAMAN PERSETUJUAN

Usulan Tugas Akhir Karya Tulis Ilmiah dengan judul “ DAYA HAMBAT DAUN SOSOR BEBEK ( Kalanchoe pinnata ) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus ” telah mendapat persetujuan.

Menyetujui,

Pembimbing

Teguh Budiharjo, S.TP, M.Si

NIP. 19680402 198603 1 002

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Kuasa, atas segala berkat dan kasihNya sehingga penulis dapat menyelesaikan Usulan Tugas Kahir Karya Tulis Ilmiah dengan judul “DAYA HAMBAT DAUN SOSOR BEBEK ( Kalanchoe pinnata ) TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus”.

Dalam penyusunan usulan Karya Tulis Ilmiah ini penulis mendapatkan bimbingan, bantuan, serta dukungan dari berbagai pihak, oleh karena itu penulis mengucapkan terima kasih kepada :

1.    Bapak Sugiyanto, S.Pd, M.App, Sc, selaku Direktur Poltekkes Kemenkes Semarang.

2.    Bapak S.Y. Didik Widiyanto, S.KM, M.Kes, selaku Ketua Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Semarang.

3.    Bapak Teguh Budiharjo, S.TP, M.Si, selaku pembimbing yang telah menyediakan waktu untuk memberikan bimbingan dalam pembuatan usulan Karya Tulis Ilmiah ini.

4.    Seluruh Dosen dan staff Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Semarang yang telah memberikan ilmu, bantuan, serta dukungan bagi penulis.

5.    Papa, mama dan adik  yang telah memberikan doa, dukungan, motivasi, dan semangat untuk pantang menyerah dan terus berjuang.

6.    Sahabatku Talitha Inez Pramesti dan Usma Az Zahro yang selalu memberikan motivasi dan setia menemani dalam mempersiapkan Usulan Karya tulis ini

7.    Teman-teman angkatan 2012 Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Semarang, yang telah bersama-sama berjuang, saling membantu, dan saling memberikan dukungan.

8.    Serta seluruh pihak yang telah membantu dalam pembuatan Usulan Karya Tulis Ilmiah ini.

Penulis sadar bahwa dalam pembuatan Usulan Tugas Akhir Karya Tulis Ilmiah ini masih belum sempurna dan masih banyak kekurangan. Untuk itu kritik dan saran sangat diharapkan penulis untuk perbaikan.

Semarang, Januari 2015

              Penulis

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL.............................................................................................. i

HALAMAN PERSETUJUAN............................................................................... ii

KATA PENGANTAR............................................................................................ iii

DAFTAR ISI......................................................................................................... v

DAFTAR TABEL.................................................................................................. vii

DAFTAR GAMBAR............................................................................................. viii

BAB I PENDAHULUAN ..................................................................................... 1

A. Latar Belakang........................................................................................... 1

B. Rumusan Masalah.................................................................................... 3

C. Tujuan ....................................................................................................... 3

D. Ruang Lingkup.......................................................................................... 4

E. Manfaat ..................................................................................................... 4

F. Keaslian Penelitian..................................................................................... 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA............................................................................. 6

A. Tinjauan Teori ............................................................................................ 6

1. Sosor bebek atau Suru bebek ( Kalanchoe pinnata ).......................... 6

a.    Klasifikasi..................................................................................... 6

b.    Morfologi....................................................................................... 6

c.    Kandungan dalam Sosor bebek ( Kalanchoe pinnata )............... 7

2. Staphylococcus aureus....................................................................... 9

a.    Morfologi....................................................................................... 9

b.    Klasifikasi..................................................................................... 10

c.    Biakan.......................................................................................... 10

d.    Toksin dan enzim......................................................................... 12

e.    Patogenitas.................................................................................. 12

3. Pertumbuhan Mikroorganisme............................................................ 13

a.    Fase – fase pertumbuhan Mikroorganisme................................. 13

b.    Faktor pertumbuhan Mikroorganisme.......................................... 15

4. Penentuan Aktivitas Antimikrobial......................................................... 17

a.    Keadaan yang mempengaruhi kerja Antimikrobial....................... 18

b.    Mekanisme kerja Zat Antimikrobial............................................... 19

c.    Uji Aktivitas Antimikrobial.............................................................. 20

B. Kerangka Teori ......................................................................................... 22

C. Kerangka Konsep .................................................................................... 22

D. Hipotesis................................................................................................... 22

BAB III METODE PENELITIAN ........................................................................ 23

A. Jenis  Penelitian ........................................................................................ 23

B. Rancangan Penelitian .............................................................................. 23

C. Variabel Penelitian..................................................................................... 24

D.Tempat dan Waktu Penelitian.................................................................... 25

E. Sampel Penelitian..................................................................................... 25

F. Definisi Operasional .................................................................................. 25

G. Alat dan Bahan ......................................................................................... 26

H. Prosedur Penelitian .................................................................................. 27

I. Pengolahan dan Analisis Data ................................................................... 30

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 32

DAFTAR TABEL

Tabel 1...... Tabel penelitian sebelumnya tentang uji daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus..................................................................... 5

Tabel 2...... Tabel desain penelitian....................................................................... 24

Tabel 3...... Tabel pengenceran sari daun Sosor bebek....................................... 28

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.. Gambar daun Sosor Bebek ( Kalanchoe pinnata )............................ 6

Gambar 2.. Gambar bakteri Staphylococcus aureus........................................... 9

Gambar 3.. Gambar koloni bakteri Staphylococcus aureus................................. 11

BAB I

PENDAHULUAN

A.     Latar Belakang

Staphylococcus  aureus  (S.  aureus)  merupakan  bakteri  gram  positif  yang  tergolong sebagai bakteri pathogen. Staphylococcus bersifat anaerobik fakultatif yang dapat tumbuh secara aerobik maupun fermentasi yang menghasilkan asam laktat dan membentuk koloni berwarna kuning. Bakteri ini memproduksi koagulase yang mengkatalis perubahan fibrinogen menjadi fibrin sehingga membuat bakteri ini mampu membuat barisan perlindungan. Staphylococcus memiliki reseptor terhadap permukaan sel pejamu dan protein matriks yang membantu organisme ini untuk melekat. Bakteri ini memproduksi enzim litik ekstraseluler yang memecah jaringan pejamu dan membantu invasi ( Gillespie & Bamford, 2009 : 32 – 33 ).

Salah satu senyawa yang digunakan untuk menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus adalah Tanin. Tanin menghambat pertumbuhan mikroba dengan mengkerutkan dinding sel sehingga mengganggu permeabilitas sel sehingga berfungsi sebagai  penghambat  pertumbuhan  bakteri  dan  jamur.  (Salisbury  &  Ross,1995  ;  Harbone, 1 1987). Tanin memiliki aktivitas antibakteri, secara garis besar mekanisme yang diperkirakan adalah toksisitas tanin dapat merusak membran sel bakteri, senyawa astringent tanin dapat menginduksi pembentukan kompleks ikatan tanin terhadap ion logam yang dapat menambah daya toksisitas tanin itu sendiri. Mekanisme kerja tanin diduga dapat mengkerutkan dinding sel atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri. Akibat terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhannya terhambat dan mati (Ajizah, 2004). Sedangkan pada konsentrasi tinggi, tanin bekerja dengan cara mengkoagulasi atau menggumpalkan protoplasma kuman, sehingga terbentuk ikatan yang stabil dengan protein kuman dan pada saluran pencernaan, tanin diketahui mampu mengelimina sitoksin. Tanin juga mempunyai daya antibakteri dengan cara mempresipitasi protein, karena diduga tanin mempunyai efek yang sama dengan senyawa fenolik. Efek antibakteri tanin antara lain melalui reaksi dengan membran sel, inaktivasi enzim, dan destruksi atau inaktivasi fungsi materi genetik (Masduki, 1996).

Staphylococcus aureus merupakan bakteri patogen pada manusia yang dapat menyebabkan luka bernanah, seperti bisul dan jerawat (Pinus, L., 1999 : 13). Bisul adalah radang pada daerah folikel rambut kulit dan sekitarnya dapat pula diartikan sebagai infeksi lokal pada kulit dalam. Bisul umumnya timbul pada wajah, leher, ketiak dan bagian pantat manusia. Bisul dianggap penyakit kulit biasa, namun pada beberapa kasus, bisul dapat tumbuh dengan cepat dan menyebar ke beberapa bagian tubuh

( Atika Mayasari, 2012 ).

  Sosor bebek ( Kalanchoe pinnata ) bersifat agak asam, dingin, bau tanah dan astringen. Masyarakat pedesaan, khususnya yang belum mengenal atau berada jauh dari fasilitas kesehatan sering menggunakan tanaman ini sebagai tanaman obat keluarga ( TOGA ). Sari daun sosor bebek digunakan untuk menyembuhkan bisul dan jerawat, sari ini diperoleh dari perasan daun sosor bebek segar. Tumbukan daunnya digunakan sebagai penghenti perdarahan, pereda demam, mengurangi pembengkakan, menutup borek, kulit terkelupas dan juga menutup luka bakar. Rebusan daun sosor bebek digunakan sebagai peluruh dahak, peluruh kencing dan sebagai antiseptic ( dr. Setiawan Dalimartha, 2007 : 139 – 142 ).

Beberapa  senyawa  yang terkandung  dalam  daun  Sosor bebek  ( Kalanchoe pinnata ) diketahui  mempunyai  kemampuan  sebagai  antibakteri. Tanaman ini mengandung Vitamin C, quercetin-3-diarabinoside, kaempferol-3-glukoside, bryophyllin dan tanin. Dimana Tanin merupakan salah satu senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus. Oleh itu, penulis ingin melakukan penelitian terhadap daya hambat daun Sosor bebek ( Kalanchoe pinnata ) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.

B.     Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka peneliti merumuskan suatu permasalahan " Apakah daun Sosor bebek ( Kalanchoe pinnata ) dapat  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ? ”

C.     Tujuan Penelitian

1.   Tujuan Umum

Mengetahui daya hambat daun Sosor Bebek ( Kalanchoe pinnata ) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus

2. Tujuan Khusus

a)    Mendeskripsikan efektivitas daun Sosor Bebek dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.

b)    Mengukur daya hambat daun Sosor bebek terhadap bakteri Staphylococcus aureus dalam konsentrasi 25%, 50%, 75% dan 100%.

c)    Menganalisis pengaruh daun Sosor bebek terhadap daya hambat pertumbuhan Staphylococcus aureus.

D.     Ruang Lingkup

Ruang lingkup penelitian ini adalah bidang Bakteriologi.

E.     Manfaat Penelitian

1. Bagi penulis

a.    Menambah pengetahuan dan wawasan mengenai khasiat tanaman tradisional yang bisa digunakan sebagai obat, khususnya mengenai khasiat Sosor bebek.

b.    Mengetahui adanya daya hambat daun Sosor bebek terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.

2. Bagi akademi

Menambah perbendaharaan karya tulis ilmiah dan menjadi sumber literatur uji daya hambat pada bidang bakteriologi di Perpustakaan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Semarang.

3. Bagi masyarakat

Memberikan informasi baru kepada masyarakat bahwa Sari daun sosor bebek dapat digunakan untuk menghambat pertumbuhkan bakteri Staphylococcus aureus, salah satu contohnya menghambat bisul

F.     Keaslian Penelitian

No	Judul Penelitian	Penyusun
1.	Uji daya hambat perasan dengan berbagai konsentrasi Bawang Merah (Allium ascalonicum) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus	ATIKA MAYASARI
2	Efektivitas perasan rimpang temulawak (Curcuma xanthorizza) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus	ANGGITA PRAMESWARI
3	Pengaruh jenis produk facial foam yang mengandung antimikroba terhadap daya hambat pertumbuhan Staphylococcus aureus secara in vitro	ASTRI HASTUTI
4	Pengaruh sari kulit Lidah Buaya (Aloe vera) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus secara in vitro	NGGELIS SEJATI

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A.     Tinjauan Teori

1.   Sosor bebek atau suru bebek ( Kalanchoe pinnata )

a.   Klasifikasi

Sosor bebek memiliki :

Kerajaan     :           Plantae

Divisi           :           Magnoliophyta

Kelas           :           Magnoliopsida

Ordo           :           Saxifragales

Famili          :           Crassulaceae

Genus         :           Kalanchoe

Seksi           :           Bryophyllum

Spesies       :           Kalanchoe pinnata

   Gambar 1. Daun Sosor Bebek ( Kalanchoe pinnata )

b.   Morfologi

1.    Daun     : berbatang basah, daun tebal pinggir beringgit, banyak mengandung air, bentuk daunnya lonjong atau bundar panjang, panjang 5 - 20 cm, lebar 2,5-15 cm, ujung daun tumpul, pangkal membundar, permukaan daun gundul, warna hijau sampai hijau keabu-abuan. Daun tunggal atau kelihatan seolah-olah berbilang 3 atau menyirip berdaun 5. Daun atau tajunya memanjang atau oval, dengan ujung yang tumpul, beringgit atau beringgit rangka p, 5-20 kali 2,5-15 cm.

2.    Batang  : segi empat, lunak, beruas, warna hijau. Batang segi empat tumpul atau hampir membulat bunga berbilangan atau kelipatan empat, menggantung, pada mulai yang tegak tidak rapat.

3.    Bunga   : bentuk malai, mahkota bentuk corong warna merah dan kelopak berdaun lekat. Buah kotak, warna ungu bernoda putih, buah silindris, melembung 1,5 - 4 cm panjangnya, taju pendek. Mahkota bentuk periuk atau lonceng, jelas menyempit di atas pangkal yang melebar, di atasnya lagi melebar, panjang 3,5-5,5 cm, bagian yang muncul di atas kelopak merah, pangkal tabung dengan 8 lipatan yang dalam, taju bulat telur bentuk lanset, bentuk ekor yang meruncing. Benang sari, dua lingkaran dengan tangkai putik panjang dan helaian sisik segi empat.      

c.   Kandungan dalam Sosor bebek ( Kalanchoe pinnata )

Beberapa  senyawa  yang terkandung  dalam  daun  Sosor bebek    ( Kalanchoe pinnata ) diketahui  mempunyai  kemampuan  sebagai  antibakteri. Tanaman ini mengandung Vitamin C, quercetin-3-diarabinoside, kaempferol-3-glukoside, bryophyllin dan tanin. Flavonglikosida, merupakan suatu senyawa fenol, flavonoid mempunyai aktivitas biologis dan farmakologis anatara lain sebagai antibakteri dianggap sebagai anti radang dan bakteriosida. ( dr. Setiawan Dalimartha, 2007 : 139 – 142 ).

Kandungan yang terdapat pada Sosor bebek :

1)   Vitamin C, Dosis yang sehat Vitamin C akan melindungi tubuh kita dari infeksi, serta menjaga kesehatan tulang dan gigi. Hal ini juga akan meningkatkan kemampuan tubuh kita untuk memperbaiki luka, serta kebal dari bakteri, virus dan infeksi. Vitamin C yang diminum akan membantu untuk menyembuhkan luka lebih cepat dan lebih baik. Vitamin C bisa mengurangi keparahan gejala demam karena flu biasa, termasuk peradangan, hidung meler dan sakit kepala. Vitamin C juga mengontrol alergi yang bisa menyebabkan demam. Hal ini akan mengurangi kadar histamin, dan seringkali dapat mempercepat menghilangkan demam.

2)   Quercetin-3-diarabinoside, zat ini dapat membantu melancarkan pengeluaran air seni bagi orang yang bermasalah dengan buang air kecil.

3)  Tanin, bermanfaat sebagai

§ Astrigensia - Pengelat dan Anti diare, Tanin dapat menciutkan (adstrigensia) dan mengeraskan dinding usus, sehingga dapat mengurangi keluar masuknya cairan dalam usus. Tanin juga dapat digunakan untuk menciutkan pori-pori kulit.

§ Anti bakteri, antara lain melalui reaksi dengan membran sel. Flavonoid dalam tanin akan mendenaturasi dan mengkoagulasi protein serta merusak membran dinding sel.

§ Antioksidan, Ketekin dalam tanin mempunyai sifat antioksidatif yang berperan dalam melawan radikal bebas yang berbahaya bagi tubuh

§ Antidotum - Penawar racun, Tanin akan mengeluarkan asam tamak yang tidak larut dan bereaksi dengan alkaloida membentuk tanat yang mengendap.

2.   Staphylococcus aureus

Bakteri yang bersifat gram positif berbentuk bulat, biasanya termasuk dalam rangkaian tidak beraturan seperti buah anggur. Beberapa diantaranya tergolong flora normal pada kulit dan selaput mukosa, menyebabkan pernanahan, abses, berbagai penyakit piogen, dan bahkan septikemia yang fatal. Staphylococcus mengandung polisakarida dan protein yang berfungsi sebagai antigen dan merupakan substansi yang penting dalam struktur dinding sel (Jawetz, 1996 : 211).

a.   Morfologi

   Gambar 2. Bakteri Staphylococcus

Kuman ini berbentuk sferis, bila menggerombol dalam suasana yang tidak teratur mungkin sisinya agak rata karena tertekan. Diameter kuman antara 0,8 – 1,0 mikron. Pada sediaan langsung yang berasal dari nanah dapat terlihat sendiri, berpasangan, menggerombol dan bahkan dapat tersusun seperti rantai pendek. Susunan gerombolan yang tidak teratur biasanya ditemukan pada sediaan yang dibuat dari perbenihan padat, sedangkan dari perbenihan kaldu biasanya ditemukan tersendiri atau tersusun sebagai rantai pendek.

Kuman ini tidak bergerak, tidak berspora dan gram positif. Hanya kadang – kadang yang gram negatif dapat ditemukan pada bagian tengah gerombolan kuman, pada kuman yang telah difagositosis dan pada biakan tua yang hampir mati. ( Staf Pengajar FKUI, 1994 )

b.   Klasifikasi

Kingdom     : Protista

Divisio         : Protopyta

Class           : Schzomycetes

Ordo           : Eubacteriales

Famili          : Micrococcaceae

Genus         : Staphylococcus

Spesies       : Staphylococcus aureus

c.   Biakan

Staphyloccocus aureus mudah tumbuh pada pembenihan bakteri dalam keadaan aerob atau mikro aerob. Tumbuh paling cepat pada suhu 37⁰C, tetapi membentuk pigmen paling baik pada suhu kamar (20-30⁰C). Koloni pada pembenihan padat berbentuk bulat halus, menonjol dan berkilau, membentuk koloni berwarna putih sampai kuning emas tua. Berbagai tingkatan hemolisis dihasilkan oleh Staphyloccocus aureus.

Pada pembenihan cair menyebabkan kekeruhan yang merata tidak membentuk pigmen. Pada nutrien agar setelah diinkubasi 24 jam koloni berpigmen kuning emas, berukuran 24 mm, bulat, cembung, tepi rata. Pada agar darah atau media BAP sekeliling koloni akan terlihat zona Beta hemolisa (zona jernih) yang lebar.

Mempunyai diameter 2-4 mm, batas koloni tegas atau jelas, permukaan halus dan mengkilap, sering membentuk pigmen warna kuning emas pada NA. Koloni sangat kecil berwarna merah muda pada MC. Media selektif diferensial untuk membedakan Staphylococcus aureus dengan spesies lainnya diantaranya adalah Manitol Salt Agar, koloni dikelilingi areal berwarna kuning. Menghasilkan katalase, meragikan banyak karbohidrat dengan lambat, tetapi tidak menghasilkkan basa, menghasilkan asam laktat (Jewetz E, dkk. 2005 : 211-212).

   Gambar 3. Koloni Staphylococcus aureus

d.   Toksin dan Enzim

Staphylococcus dapat menyebabkan penyakit karena kemampuannya berkembang biak dan menyebar luas dalam jaringan tubuh serta adanya beberapa zat yang dapat diproduksi, antara lain : eksotoksin, enterotoksin, koagulase, katalase, dan enzim lain berupa hialuronidase atau faktor penyubur, proteinase, lipase dan β-laktase (Jawetz, E, dkk., 1996 : 213-214).

1)    Eksotoksin adalah toksin yang dikeluarkan oleh sel. Bakteri menyebar melalui aliran darah ke seluruh tubuh, seterusnya melalui alat-alat tertetu, kemudian menunjukan gejala penyakit.

2)    Lekositin yaitu dihasilkan oleh Staphylococcus bersifat mematikan lekosit dari berbagai macam spesies binatang.

3)    Enterotoksin yaitu suatu suspensi yang dihasilkan oleh jenis Staphylococcus tertentu terutama bila ditanam media setengah padat dengan konsentrasi CO² (30%)

4)    Koagulase yaitu enzim yang dapat mengkoagulasikan plasma sitrat, plasma oksalat.

e.   Patogenitas

Manusia merupakan pembawa Staphylococcus aureus dalam hidung sebanyak 40-50%, juga biasanya ditemukan di baju, sprei, dan benda – benda lainnya di lingkungan sekitar manusia. Staphylococcus aureus yang patogen dan infasif cenderung menghasilkan koagulase dan pigmen kuning serta bersifat hemolitik (Jawetz, E, dkk., 1996 :  214) yang menyebabkan penyakit dari Staphylococcus adalah gabungan dari efek yang ditimbulkan oleh produk – produk ekstraseluler, daya infeksi bakteri dan kemampuan untuk berkembang biak.

Pada dasarnya Staphylococcus aureus peka terhadap obat-obatan yang dapat mematikan kuman-kuman Gram positif, tetapi kuman ini mudah sekali menjadi resisten ( Gerard Bonang dan Enggar S.Koeswardono, 1982 : 114). Infeksi yang ditimbulkan oleh Staphylococcus aureus dapat berupa pernanahan lokal (abses), infeksi luka pascabedah dan infeksi paru-paru.

Selain itu, Staphylococcus aureus dapat menyebabkan infeksi kronis, misalnya pada osteomielitis dan endokarditis. Staphylococcus aureus juga merupakan salah satu penyebab utama infeksi nosokomial akibat luka tindakan operasi dan pemakaian alat-alat perlengkapan perawatan di rumah sakit. Pada makanan, Staphylococcus aureus dapat menyebabkan keracunan akibat enterotoksin yang dihasilkannya dan menyebabkan sindrom renjat toksik (toxic shock syndrome) akibat pelepasan superantigen ke dalam aliran darah.

3.   Pertumbuhan Mikroorganisme

Pertumbuhan adalah peningkatan jumlah seluruh komponen dari suatu organisme secara teratur. Perkembang-biakan adalah akibat dari pertumbuhan dalam organisme uniseluler, pertumbuhan mengakibatkan peningkatan jumlah individu yang merupakan anggota populasi atau biakan tertentu.

a.    Fase-fase pertumbuhan mikroorganisme

Perkembang-biakan pada mikroorganisme memiliki beberapa fase pertumbuhan, yaitu :

1)    Fase penyesuaian

Fase penyesuaian merupakan suatu masa saat sel-sel menyesuaikan diri dengan lingkungannya yang baru. Sel-sel tersebut kekurangan metabolit dan enzim, akibat dari keadaan yang tidak menguntungkan dalam pembiakan terdahulu. Enzim-enzim dan zat-zat antara terbentuk dan terkumpul sampai mencapai konsentrasi yang memungkinkan pertumbuhan sel dimulai kembali.

2)    Fase pertumbuhan awal

Setelah mengalami adaptasi, pertumbuhan sel dimulai dengan kecepatan yang rendah karena baru menyelesaikan tahap penyesuaian diri.

3)    Fase eksponensial

Fase eksponensial merupakan suatu masa saat sel-sel berada dalam keadaan yang stabil. Sel-sel baru terbentuk dengan laju yang konstan sehingga jumlah mikroorganisme bertambah secara eksponensial. Fase ini berlangsung hingga satu atau lebih zat makanan, oksigen pada organisme anaerob dalam media pembenihan habis atau terkumpul produk metabolisme yang beracun berkumpul sehingga pertumbuahannya terhambat.

4)    Fase pertumbuhan lambat

Pada fase ini, pertumbuhan sel tidak stabil, namun jumlah populasi masih naik. Hal ini dikarenakan jumlah sel yang tumbuh masih lebih banyak daripada sel yang mati.

5)    Fase stasioner maksimum

Mikroorganisme kehabisan zat makanan dan penumpukan produk metabolisme yang beracun akan menyebabkan pertumbuhan mikroorganisme berhenti.

6)    Fase kemunduran (Fase kematian)

Setelah fase stasioner, jumlah sel yang mati bertambah sehingga mencapai suatu fase yang stabil. Kestabilan tersebut terjadi setelah sebagian besar sel mati, sejumlah kecil sel yang selamat dapat bertahan, tumbuh dengan zat makanan yang dilepaskan oleh sel-sel yang mati dan lisis.

b.    Faktor pertumbuhan mikroorganisme

Faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme :

1)    Nutrisi

Pada umumnya meliputi adanya donor hidrogen dan penerima hidrogen, sumber karbon, sumber nitrogen, mineral, faktor-faktor pertumbuhan (asam amino, purin, pirimidin).

2)    pH

Bakteri memerlukan pH tertentu untuk pertumbuhannya. Kebanyakan bakteri tumbuh subur pada pH 6,5-7,5 (pH netral). Hal inilah yang menyebabkan makanan tertentu dapat diawetkan dengan penambahan suasana asam atau secara fermentasi. Untuk menetralkan asam dan mempertahankan pH, bahan kimia dapat ditambahkan ke dalam media. Alkalinitas juga dapat menghambat pertumbuhan bakteri, tetapi jarang digunakan untuk upaya pengawetan makanan.

3)    Suhu

Pola pertumbuhan bakteri sangat dipengaruhi oleh suhu karena semua proses pertumbuhan bergantung pada reaksi kimiawi dan laju reaksi kimiawi tersebut dipengaruhi oleh suhu. Sebagian besar bakteri tumbuh optimal pada suhu tubuh manusia meskipun ada beberapa bakteri yang dapat tumbuh dalam lingkungan ekstrim (di luar batas pertahanan organisme eukariotik). Berdasarkan perbedaan suhu tumbuh, bakteri digolongkan menjadi:

1)    Psikrofil (cold loving bacteria), yaitu bakteri yang tumbuh pada suhu 0^oC dengan suhu optimum 15^oC dan tidak tumbuh pada suhu kamar (25^oC). Bakteri ini sering ditemukan di laut dalam dan daerah kutub, serta sering menimbulkan masalah pada pengawetan makanan.

2)    Mesofil (moderate temperature loving bacteria), yaitu bakteri yang tumbuh optimal pada suhu 25-40^oC dan merupakan bakteri yang paling banyak ditemukan. Bakteri ini dapat beradaptasi untuk hidup dan tumbuh pada suhu optimum di sekitar suhu inangnya. Suhu optimum bakteri ini umumnya sekitar 37^oC. Bakteri mesofil termasuk sebagian besar bakteri yang menyebabkan kerusakan dan penyakit pada manusia.

3)    Termofil (heat loving bacteria), yaitu bakteri yang dapat tumbuh pada suhu 50-60^oC. Suhu seperti ini dapat terjadi di dalam tanah yang disinari matahari dan dalam sumber air panas. Endospora bakteri ini biasanya tahan terhadap pemanasan dan dapat bertahan di dalam makanan kaleng.

4)    Penganginan

Oksigen berperan dalam penerimaan hidrogen pada mikroba.

5)    Tekanan Osmotik.

Bakteri memperoleh semua nutrisi dari cairan di sekitarnya dan membutuhkan air untuk pertumbuhan. Tekanan osmotik yang tinggi dapat menyebabkan air keluar dari dalam sel bakteri. Apabila konsentrasi garam atau gula dalam larutan lebih tinggi daripada konsentrasi yang ada dalam sel bakteri maka dapat menyebabkan air keluar dari sel bakteri kemudian akan menghambat pertumbuhan atau mengakibatkan plamolisis, yaitu keluarnya cairan dari sel bakteri melalui membran sitoplasma. Di sisi lain, ada beberapa jenis bakteri yang dapat beradaptasi dengan baik pada garam yang tinggi, biasanya disebut dengan bakteri halofil.

4.   Penentuan Aktivitas Antimikrobial

Sebagai istilah umum, bahan antimikrobial diartikan sebagai bahan yang mengganggu pertumbuhan dan metabolisme mikroba. Dalam penggunaan umum, istilah ini menyatakan penghambatan pertumbuhan dan bila dimaksudkan untuk kelompok-kelompok organisme yang khusus, maka seringkali digunakan istilah-istilah seperti antibakterial atau antifungal.

Beberapa bahan antimikrobial digunakan secara khusus untuk mengobati infeksi. Ini disebut bahan terapeutik. Alasan utama untuk mengendalikan mikroorganisme dapat dirangkum sebagai berikut:

-      Mencegah penyebaran penyakit dan infeksi

-      Membasmi mikroorganisme pada inang yang terinfeksi

-      Mencegah pembusukan dan perusakan bahan oleh mikroorganisme (Michael, J, 2008 : 448-450).

Zat antimikrobial harus mempunyai sifat-sifat, antara lain:

-      Mempunyai kemampuan menghambat atau membunuh patogen tanpa merusak inang (host)

-      Bersifat bakteriosida dan bukan bakteriostatik

-      Tidak menyebabkan resistensi pada kuman patogen

-      Tidak menimbulkan alergenik/ menimbulkan efek samping bila digunakan dalam waktu lama

-      Serta tidak mengganggu keseimbangan flora normal dari inang (flora normal usus maupun flora normal kulit) (Lud, W, 2005 : 234).

a.   Keadaan yang memperngaruhi kerja Antimikrobial

Banyak faktor dan keadaan dapat mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme. Kesemua ini harus dipertimbangkan bagi efektifnya penerapan praktis metode-metode pengendalian. Keadaan-keadaan yang mempengaruhi kerja antibakterial sebagai berikut:

1)  Konsentrasi atau intensitas zat antimikrobial

Apabila konsentrasi atau intensitas zat antimikrobial maka se-sel mikroorganisme akan terbunuh lebih cepat.

2)  Jumlah mikroorganisme

Bila jumlah sel nya banyak, maka perlakuan harus diberikan lebih lama supaya kita cukup yakin bahwa semua sel tersebut mati.

3)  Suhu

Hal ini dapat diterangkan sebagai berikut: zat kimia merusak mikroorganisme melalui reaksi-reaksi kimiawi dan laju reaksi kimiawi dipercepat dengan meningkatkan suhu.

4)  Spesies mikroorganisme

Spesies mikroorganisme menunjukan kerentanan yang berbeda-beda terhadap zat antimikrobial. Telah diketahui bahwa pada spesies pembentuk spora, sel vegetatif yang sedang tumbuh lebih mudah dibunuh dibandingkan dengan sporanya.

5)  Adanya bahan organik

Adanya bahan organik asing dapat menurunkan dengan nyata keefektifan zat kimia antimikrobial dengan cara menginaktifkan bahan tersebut.

6)  Keasaman atau kebasaan (PH)

Mikroorganisme yang terdapat pada bahan dengan PH asam dapat dibasmi pada suhu yang lebih rendah dan dalam waktu yang lebih singkat dibandingkan denga mikroorganisme yang sama di dalam lingkungan basa (Michael, J, 2008 : 452-456).

b.   Mekanisme Kerja Zat Antimikrobial

Berbagai cara yang digunakan zat-zat antimikrobial dalam merusak sel-sel mikroba, sebagai berikut:

1)  Kerusakan pada dinding sel

Stuktur dinding sel dapat dirusak dengan cara menghambat pembentukannya atau mengubahnya setelah selesai terbentuk.

2)  Perubahan permeabilitas sel

Membran sitoplasma mempertahankan bahan-bahan tertentu di dalam sel serta mengatur aliran keluar-masuknya bahan-bahan lain. Membran memelihara integritas komponen-komponen selular. Kerusakan pada membran ini akan mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel atau matinya sel.

3)  Penghambatan kerja enzim

Setiap enzim dari beratus-ratus enzim yang berbeda-beda di dalam sel merupakan sasaran potensial bagi bekerjanya suatu penghambat. Banyak zat kimia yang telah diketahui dapat mengganggu reaksi biokimiawi. Penghambatan ini dapat mengakibatkan terganggunya metabolisme atau matinya sel.

4)  Penghambatan sintesis asam nukleat dan protein

DNA, RNA dan protein memegang peran penting dalam proses kehidupan normal sel. Hal itu berarti bahwa gangguan apapun yang terjadi pada pembentukan atau pada fungsi zat-zat tersebut dapat mengakibatkan kerusakan total pada sel (Michael, J, 2008 : 456-458).

c.   Uji Aktivitas Antimikrobial

Penentuan kepekaan bakteri patogen terhadap antimikroba dapat dilakukan dengan salah satu dari dua metode pokok yakni dilusi dan difusi.

1.    Metode Dilusi

Metode ini menggunakan antimikroba dengan kadar yang menurun secara bertahap baik dengan media cair atau padat. Kemudian media diinokulasi bakteri uji dan dieramkan. Tahap akhir dilarutkan antimikroba dengan kadar yang menghambat atau mematikan. Uji kepekaan cara dilusi agar memakan waktu dan penggunaannya dibatasi pada keadaan tertentu saja. Uji kepekaan cara dilusi cair dengan menggunakan tabung reaksi, tidak praktis dan jarang dipakai, namun kini ada cara yang lebih sederhana dan banyak dipakai, yakni menggunakan mikrodilution plate. Keuntungan uji mikrodilusi cair adalah bahwa uji ini memberi hasil kuantitatif yang menunjukkan jumlah antimikroba yang dibutuhkan untuk mematikan bakteri.

2.    Metode Difusi

Metode yang paling sering digunakan adalah metode difusi agar. Cakram kertas saring berisi sejumlah tertentu obat ditempatkan pada permukaan medium padat yang sebelumnya telah diinokulasi bakteri uji pada permukaannya. Setelah inkubasi, diameter zona hambatan sekitar cakram digunakan untuk mengukur kekuatan hambatan obat terhadap organisme uji. Penggunaan cakram tunggal pada setiap antibiotik dengan standarisasi yang baik, bisa menentukan apakah bakteri peka atau resisten dengan cara membandingkan zona hambatan standar bagi obat yang sama. Daerah hambatan sekitar cakram yang berisi sejumlah tertentu antimikroba tidak mencerminkan kepekaan pada obat dengan konsentrasi yang sama per mililiter media, darah atau urin.

B.     Kerangka Teori

 

pH

                                                 

 

                                                     

			Zat Penghambat :                Daun Sosor Bebek

 

C.   Kerangka Konsep

	Sari daun Sosor Bebek 20%, 50%, 75% dan 100%

 

Daya hambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus

                                                                               

D.   Hipotesis

Ho:      Tidak ada daya hambat sari daun sosor bebek ( Kalanchoe pinnata )  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.

Ha:      Ada daya hambat sari daun sosor bebek ( Kalanchoe pinnata )  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.

                                                    

BAB III

METODELOGI PENELITIAN

A.     Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang dilakukan adalah penelitian eksperimental yang digunakan untuk menguji hipotesis yang ada sehingga diketahui pengaruh antar variabel, dengan menguji sampel menggunakan metode difusi.

B.     Rancangan Penelitian

Penelitian ini menggunakan desain Rancangan Acak Lengkap (RAL) yang merupakan rancangan paling sederhana di antara rancangan baku untuk menentukan banyaknya ulangan pada suatu percobaan. Adanya pengulangan diharapkan dapat meningkatkan ketepatan percobaan dengan memperkecil galat baku (standard deviation) satuan percobaan dan sebagai satuan dasar ukuran untuk menetapkan taraf nyata (level significant).

Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan rumus Gomez and Gomez terlebih dahulu untuk mendapatkan hasil perulangan yang akan dikalikan dengan perlakuan sampel dengan 4 konsentrasi yaitu 25%, 50%, 75%, dan 100% dengan konsentrasi 0% sebagai kontrol negatif (tidak dimasukkan dalam perlakuan sampel) serta antibiotik sebagai kontrol positif. Rumus ulangan yaitu:

(r n – 1) - (n – 1)        ≥ V2

(r n – 1) - (n – 1)        ≥ 6

(r4 – 1) - (4 – 1)         ≥ 6

4r – 1                         ≥ 6 + 3

4r – 1                         ≥ 9

4r                               ≥ 10

r                                 ≥ 10/4

r                                 ≥ 2,5

r                                 ≈ 3

Keterangan :

r    = jumlah pengulangan

n  = jumlah perlakuan sampel

V2 = derajat bebas galat

Jadi banyaknya pengulangan adalah sebanyak 3 kali dengan jumlah perlakuan sebanyak 6 maka dihasilkan unit sampel sebanyak 18. Untuk mengetahu ada tidaknya kontaminasi dalam pengukuran, maka penelitian akan dilakukan secara duplo. Hasil penelitian disajikan dalam bentuk tabel sebagai berikut :

Tabel 2. Desain Penelitian

Treatment	Perulangan
	I		II		III
Antibiotik	A1.P1	A1a.P1	A1.P2	A1b.P1	A1.P3	A1c.P1
0 %	A2.P1	A2a.P1	A2.P2	A2b.P2	A2.P3	A2c.P2
25%	A3.P1	A3a.P1	A3.P2	A3b.P3	A3.P3	A3c.P3
50%	A4.P1	A4a.P1	A4.P2	A4b.P4	A4.P3	A4c.P4
75%	A5.P1	A5a.P1	A5.P2	A5b.P5	A5.P3	A5c.P5
100%	A6.P1	A6a.P1	A6.P2	A6b.P2	A6.P3	A6c.P3

Keterangan :

A       : Perlakuan pemberian volume daun Sosor Bebek ( Antibiotik,   0%, 25%, 50%, 75%, 100% )

P       : Pengulangan (1, 2 dan 3)

a,b,c  : Duplo

C.     Variabel Penelitian

1.  Variabel Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah zat hambat bakteri Staphylococcus aureus yang berupa sari daun Sosor bebek.

2.  Variabel Terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah daya hambat daun Sosor bebek terhadap bakteri Staphylococcus aureus dengan metode Difusi.

D.     Tempat dan Waktu Penelitian

·         Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Kampus III Poltekkes Kemenkes Semarang.

·         Waktu penelitian dilakukan pada bulan Februari 2014.

E.     Sampel Penelitian

Sampel yang diteliti adalah daun Sosor bebek, yang  berciri-ciri sebagai berikut; helaian daun lonjong, bertangkai panjang ujung tumpul, pangkal membulat, pinggir beringgit, permukaan daun gundul, panjang daun 5 – 20 cm dengan lebar daun 2,5 – 15 cm bewarna hijau sampai hijau keabu-abuan sebanyak 500 gram.

F.     Definisi Operasional

1.   Bakteri yang digunakan adalah strain biakan bakteri Staphylococcus aureus  ATCC 25923.

2.   Zona hambat adalah daerah bening di sekitar paper disk pada metode difusi dimana sama sekali tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri dari daun Sosor bebek ( Kalanchoe pinnata ) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus yang diukur menggunakan jangka sorong dengan satuan mm.

3.    Zat hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus yang berupa sari daun Sosor bebek dalam konsentrasi 25%, 50%, 75% dan 100%. Sari ini diperoleh dari pemerasan daun Sosor bebek segar yang diperoleh di sekitas pekarangan rumah warga di daerah Jl. Merpati Tengah – Pedurungan. Daun yang diambil adalah pucuk daun ( daun muda ) pada waktu sore hari untuk mencegah adanya pengembunan.

G.    Alat dan Bahan

1.            Alat

o   Alumunium foil

o   Autoclave

o   Batang pengaduk / stirrer

o   Bunsen

o   Cawan petri

o   Erlenmeyer

o   Beaker glass

o   Handscoon dan masker

o   Hot plate

o   Inkubator

o   Jangka sorong

o   Kertas cakram

o   Ose

o   Pinset

o   Pipet ukur

o   Tabung reaksi dan rak

o   Kapas

o   Lidi yang dililit dengan kapas steril

o   Timbangan analitik

o   Vortex

2.      Bahan

a.       Alkohol 70%

b.       Biakan murni Staphylococcus aureus ATCC 25923

c.       Aquadest

d.       Plate Count Agar

e.       NaCl Fisiologi

f.        Daun Sosor bebek

H.     Prosedur Penelitian

I.    Persiapan Alat dan Bahan

1.    Sterilisasi alat gelas

Sterilisasi alat dengan cara membungkus alat-alat dengan alumunium foil, kemudian masukkan ke dalam autoclave pada suhu 121⁰C dengan tekanan 1 Atm selama 15 menit, atau menggunakan oven dengan suhu 180⁰C selama 2 jam.

2.    Sterilisasi aquadest

Aquades dimasukkan dalam labu Erlenmeyer dan ditutup dengan alumunium foil kemudian dimasukkan dalam autoclave pada suhu 121°C selama 15 menit dengan tekanan 1 atm.

3.    Pembuatan media PCA (Plate Count Agar)

Komposisi media PCA (Plate Count Agar) terdiri dari 0,5% pepton; 0,25% yeast extract; 0,1% glucose; 1,5% agar.

Cara membuat media :

Ditimbang 22,5 gram bahan dilarutkan dalam 1 liter aquades steril, lalu campur hingga homogen. Autoclave 15 menit pada suhu 121⁰C dengan tekanan 1 atm. Kemudian media dituang pada cawan petri steril. Tebal media adalah ketebalan media yang dituang pada cawan petri. Ketebalan agar – agar sekitar 4 mm, kurang dari itu difusi lebih cepat, lebih dari itu difusi lambat.  Masing-masing cawan petri diisi ± 20 ml media.

4.    Pembuatan larutan uji

Daun Sosor bebek  dihaluskan sampai halus menggunakan cawan porselen lalu diperas dengan saringan. Hasil yang diperoleh merupakan konsentrasi 100% kemudian dilakukan pengenceran menjadi 25%, 50%, dan 75% dengan aquadest.

Rumus pengenceran :

 V1 x N1 = V2 x N2

setelah dilakukan perhitungan menggunakan rumus pengenceran, maka volume sari daun Sosor bebek dan aquadest steril yang akan dibuat menjadi larutan uji adalah :

Tabel 4. Pengenceran sari daun Sosor Bebek

Konsentrasi	0%	25%	50%	75%	100%
Rebusan Daun Sosor Bebek	-	1,25 ml	2,5 ml	3,75 ml	5 ml
Aquadest Steril	5 ml	3,75 ml	2,5 ml	1,25 ml	-

5.    Pembuatan suspensi bakteri Staphylococcus aureus

Strain murni Staphylococcus aureus ATCC 25923 diambil menggunakan jarum ose, kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 3 ml larutan garam fisiologis ( NaCl ) 0,85 % lalu disesuaikan kekeruhannya dengan larutan standart McFarland yaitu 0,5 Mc Farland yang mempunyai kekeruhan yang sama dengan suspensi yang mengandung 1,5 x 10⁸ CFU/ml. Jika nilai kekeruhannya kurang dari 0,05 Mc Farland maka perlu ditambahkan strain murni bakterinya sedangkan jika nilai kekeruhannya lebih dari 0,05 Mc Farland maka yang perlu ditambahkan adalah larutan NaCl fisiologis.

6.    Pembuatan paper disc

Cakram / paper disc diperoleh dari pasaran secara komersial dengan diameter 5,5 mm. Cakram yang digunakan untuk metode difusi direndam di dalam larutan uji, kriteria perendaman dilakukan sampai jenuh, yaitu sampai cakram tidak bisa lagi meresap larutan. Kemudian ditiriskan sampai tidak ada larutan yang menetes.

II.   Uji efektivitas antibakteri

a.    Penanaman pada media Plate count Agar (PCA)

1)    Menyiapkan media Plate count Agar (PCA)

2)    Mencelupkan lidi kapas steril kedalam suspensi bakteri yang sudah distandarisasi kekeruhannya, tunggu sebentar supaya cairan dapat meresap ke dalam kapas. Kemudian lidi dapat diangkat dan diperas dengan menekan pada dinding tabung bagian dalam sambil diputar-putar.

3)    Pulaskan pada permukaan Plate Count Agar sampai seluruh permukaan tertutup rapat dengan pulasan-pulasannya, biasanya dilakukan 3-4 kali pemulasan permukaan. Lidi kapas dibolak-balik, dari pulasan pertama ke pulasan selanjutnya plate diputar 450.

4)    Biarkan Plate count Agar (PCA) di atas meja selama 5 - 15 menit supaya suspensi bakteri berdifusi ke dalam agar.

b.    Perlakuan dengan sari daun Sosor bebek

Paper disk direndam dalam daun Sosor bebek dengan konsentrasi tertentu dan NaCl Fisiologis 0,85% sebagai kontrol sampai jenuh (paper disk tidak mampu menyerap sari daun Sosor bebek). Kemudian paper disk yang telah direndam tersebut diletakkan pada media Plate count Agar (PCA).

c.    Inkubasi

Media yang telah diberi sari daun Sosor bebek diinkubasikan selama 24 jam pada suhu 37⁰C.

d.    Pembacaan hasil

Pembacaan dilakukan dengan menggunakan Jangka Sorong. Diukur diameter zona hambatan dari tepi yang satu ke tepi yang lain melewati titik pusat paper disk, hasilnya dicatat dalam satuan mm.

I.       Pengolahan dan Analisa Data

Data dari penelitian ini terdiri dari enam perlakuan yaitu sari daun sosor bebek 25%, 50%, 75%, dan 100% serta dua kontrol yaitu kontron negatif ( 0% ) dan kontrol positif ( Antibiotik ). Pengulangan dilakukan sebanyak tiga kali secara duplo. Data dari hasil penelitian ini berupa diameter daya hambat dalam mm. Pengolahan data yang didapat menggunakan uji statistik Anova (Analysis of Variant). Uji Anova menggunakan program SPSS apabila data terdistribusi normal  (P> 0,01) dengan derajat kepercayaan 99%.

Ketentuan :

         = Ho diterima dan Ha ditolak

         = Ho ditolak dan Ha diterima

Data tersebut dilakukan uji lanjut berdasarkan koefisien keragaman (KK). Koefisien keragaman digunakan untuk melihat lebih lanjut kelompok yang berbeda rata-ratanya dari pengujian ANOVA. Koefisien keragaman juga dapat menunjukkan derajat kebenaran dari suatu percobaan, yaitu dengan rumus :

Keterangan =

KK           : Koefisien Keragaman

       : Rata-rata kuadrat dalam

              : Mean keseluruhan

Uji pengaruh yang digunakan adalah sebagai berikut :

1.    Jika KK besar (minimal 10%  pada kondisi homogen) maka uji yang digunakan adalah uji Duncan.

2.    Jika KK kondisi sedang (5 - 10% pada kondisi homogen) maka uji yang digunakan adalah uji LSD (Least Significance Deferance).

3.    Jika KK kecil (maksimal 5% pada kondisi homogen) maka uji yang digunakan adalah uji Tukey.

Berdasarkan uji lanjut pada uji ANOVA diatas dapat diketahui kelompok mana saja yang berbeda nyata pengaruhnya terhadap daya hambat Staphylococcus aureus.